一,、原理

　　定量的抗原加入到含有一定量的相應(yīng)抗體的瓊脂糖凝膠中，在電場(chǎng)作用下,，引起抗原抗體的遷移和相互反應(yīng),，當(dāng)比例合適時(shí)形成肉眼可見(jiàn)的沉淀峰，由于電泳繼續(xù)進(jìn)行,，樣品孔不斷有抗原移向抗原抗體復(fù)合物的沉淀峰,，因抗原過(guò)剩使沉淀溶解而在前面又形成新的抗原抗體復(fù)合物的沉淀峰。如此反復(fù)向前,，直到再無(wú)游離抗原而反應(yīng)終止,，形成上行火箭狀的沉淀峰，其沉淀峰高度和抗原的濃度成正比,，與同樣條件下的已知濃度的抗原血清比較,，即可求得待測(cè)血清的抗原含量。

　　二,、試劑(以ApoB為例)

　　1.瓊脂糖,。

　　2.巴比妥鈉緩沖液(μ=0.05,，pH=8.6):巴比妥鈉10.30g,，巴比妥1.84g、甘氨荎1.0g,、PEg 60004g,，加900ml水加溫助溶，待冷,，加1mol/L調(diào)pH至8.6,，混勻，轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶?jī)?nèi),，再加水到刻度,，測(cè)試pH后裝瓶待用。

　　3.羊抗人ApoB血清(效價(jià)1：128以上)

　　4.ApoB標(biāo)準(zhǔn)血清,。

　　5.固定液：1%鞣酸或10%三氯醋酸,。

　　6.氨基黑10B染色液：氨基黑10B0.1g，溶于100ml甲醇-醋-水溶液(7：1：2),。

　　三,、操作

　　1.用巴比妥鈉緩沖液配制1.5%瓊脂糖液，在水浴煮溶，置56℃水箱備用,。

　　2.取巴比妥鈉緩沖液3.36ml入小三角燒瓶?jī)?nèi),，再加抗人ApoB抗血清0.04ml，充分混和,，預(yù)溫至56℃,。

　　3.在預(yù)溫至56℃的3.4ml抗血清緩沖液內(nèi)，加入1.5%瓊脂糖3.5ml,，混勻,，立即倒入預(yù)封好的有機(jī)玻璃架內(nèi)，待凝,。

　　4.用打孔器按圖打孔,，孔徑3mm?？拙?mm,。

　　5.置凝膠板于水平電泳槽內(nèi)，兩極用三層濾紙搭橋,，抗原一端接陰極,，另一端接陽(yáng)極。

　　6.以電壓12V/cm通電,，用微量進(jìn)樣器準(zhǔn)確加入等測(cè)血清5μl(1：20或1：30稀釋),。

　　電泳2～3h后，關(guān)閉電源,，置凝膠板于10.0%三氯醋酸液固定15～20min,，取出膠板，在黑色背景燈光下量取沉淀峰高度,，如圖18-3所示,。

　　圖18-3 免疫火箭瓊脂糖電泳圖

　　7.計(jì)算

　　(1)查標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　(2)按下式計(jì)算：